Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的现实生活中逐渐扩展

从第一次再次出现肾脏自身突变到再次出现1型号心血管疾病药理学呕吐的成果亲率在成年人时期就有很好的所述，多个肾脏自身突变特征性的成年人在此之前有70%在血清转换后10年内患上心血管疾病，而随访15年的成年人这一人口比例减低到84%。比起之下，占药理学1型号心血管疾病一半以上的型号1型号心血管疾病的得病机制还无法取得更进一步的科学研究。

越来越多的人开始应用于依此系统来定义1型号心血管疾病的成果：有机微在再次出现多种肾脏自身突变时带入第1之前，再次出现皮质醇异常时带入第2之前，再次出现呕吐时带入第3之前。一些多发肾脏自身突变特征性的有机微，在1期和2期，成果较比速度快，并持续发展为得病的1型号心血管疾病。我们在此之前所述了一三组在首次验证到多种肾脏自身突变样品后非常不算10年无心血管疾病的亦然比速度快成果者，这三组症状人数不算，但形态颇为明确。随后，我们推断出肾脏自身蛋白质特异性CD8+T细胞会反应在成果亦然快的症状在此之前基本上不存在，但在早先得病和长期存在的心血管疾病症状在此之前很较难验证到。这不太可能确实，与成果症状比起，这些症状自身免疫反应的通气减弱。

最初科学研究确实，尽管通气性T细胞会(Treg)数量较长时间，但心血管疾病症状存在一些动态原因，其在此之前包括对IL-2的反应意志力下降。此外，心血管疾病症状在此之前的现象CD4+T细胞会不太可能对通气更具抵抗性，显出为现象T细胞会的抑制作用减慢，自然产生的Treg和微外产生的正向Treg，以及蛋白质经历的CD4+T细胞会在此之前IL-2反应减慢。本科学研究的目的是所述了CD4+通气性T细胞会(Treg)在领头亦然亦然快成果者在此之前的形态，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访间隔时间为18-32年。

方法：BOX科学研究是一项以人群系统化的纵向科学研究，在21岁以下患病的症状亲属在此之前身心健康检查1型号心血管疾病的小心主因。我们在此之前所述了长期亦然快成果者的形态，他们保持良好多重肾脏自身突变特征性不算于10年，但无法再次出现心血管疾病的药理学呕吐，比速度快性或非展开性自身免疫。随后，10名继续保持良好无心血管疾病并愿意包括大量微内样品的亦然快成果者纳入T和B细胞会动态数据分析。在目前的科学研究在此之前，8名比速度快成果者(SP三组)，在此之前位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁相互间的肾脏自身突变特征性。所有的自发性都西北面1型号心血管疾病成果的1期，尽管一些人随后一落千丈了肾脏自身突变对某些蛋白质的特征性反应，然而，一名症状已经西北面2期非常不算6年，但无法再次出现药理学呕吐，一名症状被诊断为心血管疾病，该实验者72岁，在采自实验样品时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在数据数据分析在此之前对该酪氨酸展开了实际上风险评估。除去外周血单个核细胞会(PBMCs)，改用多参数流式细胞会心法和T细胞会抑制作用试验风险评估酪氨酸在此之前Treg的频带、显出型号和动态。应用于FlowSOM和CITRUS(聚类检验、表征和回归)展开无督导聚类数据分析，风险评估Treg显出型号。

结果：与身心健康酪氨酸比起，来自比速度快成果微的梦境CD4+T细胞会的督导聚类推断，激来生的梦境CD4+ Treg频带减低，与利尿剂正向的TNFR之外受微(GITR)重申减低有关。一名HbA1c升高的症状与成果亦然快者和归一化的对照三组比起，Treg谱有所多种不同。动态数据结果确实，与身心健康酪氨酸比起，来自亦然快成果微的Treg介导的CD4+现象T细胞会抑制作用微小受损。显出为对现象CD4+T细胞会CD25和CD134重申的抑制作用减低。

上图1 了解的显出型号数据分析推断，CD4+Treg亚型号在比速度快成果表头在此之前减低。由FlowSOM填充的Treg寝室，汇聚在来自所有酪氨酸的来生CD4+CD45RA -细胞会上。根据标识物重申检验出10个元簇:梦境T细胞会_1;梦境T cell_2;梦境T cell_3;梦境T cell_4;CD49b梦境T细胞会;HLA-DR + GITR +梦境T细胞会;文件系统Treg_1;文件系统Treg_2;文件系统Treg_3;和文件系统Treg_4。(a)应用于9个多种不同Treg标识填充的10个元簇的MST。每个路由亦然一个战斗群(100个战斗群)，更大的元战斗群(10个元战斗群)在路由三组附近上色。每个路由在此之前的饼上图说明单个标识的重申档次。(b)每个元聚类的热上图，以推断连续性标识重申。(c, d)为HD三组(c)和SP三组(d)填充上图，以及FlowSOM比对的每个元簇的基岩。(e-l)相对于稀土元素为每个metacluster箱线或上图(稀土元素> 0.05%)确定为HD和SP三组:文件系统Treg_2 (e),文件系统Treg_3 (f),文件系统Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +梦境T细胞会(h)、梦境T cell_1(i),梦境T cell_2 (j),梦境T cell_3 (k) n d CD49b梦境T细胞会(l)。深紫色格子亦然捐助者SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检测。此键适用于上图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

上图2 应用于CITRUS的预测模型号猜测，Treg频带的减低是成果亦然快的标志。分级离子通道(a - f)和柑橘数据分析(g-k)比较SP自发性和归一化的HD自发性在CD4+CD45RA−T细胞会上的歧异。(a)杂交CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群微的亦然性上图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR重申展开除去，演示FlowSOM群微。(b) HD(外缘)和SP(星点)三组以及酪氨酸SP 606(深紫色)在此之前CD25+ cd127的频带核心内容上图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+离子通道闭包的箱线或上图;(c) HLA-DRloGITR−(文件系统Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(文件系统Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(文件系统Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+文件系统T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3重申强度着色，左下角突出的簇被比对为SP和HD表头相互间的多种不同。(j)箱线或上图推断了在SP(星点)和HD(灰点)三组在此之前，CITRUS梦境Treg_3和Treg_4的相对于稀土元素(人口比例)。(k)直方上图推断每个簇的显出型号(粉红色)和Treg标识相对于重申与背景重申(紫色);上列，文件系统Treg_3;下面一行，文件系统Treg_4。背景与所有其他簇在此之前标识的重申有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检测

上图3 与身心健康献血者比起，成果亦然快者梦境treg的GITR减低。每个梦境CD4+T细胞会元簇(梦境T细胞会_1;梦境T cell_2;梦境T cell_3;CD49b +梦境T细胞会;HLA-DR + GITR +梦境T细胞会;文件系统Treg_2;文件系统Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)验证每个重申标识的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)表头的重申热上图(sp606不包括在内)。(c,d)梦境Treg_4元簇在此之前所有HD(灰色)、所有SP(紫色)和SP 606(深紫色)的FlowSOM GITR重申串连，推断直方上图(c)和核心内容上图(d)。Wilcoxon配对符号秩和检测，p< 0.07(深紫色)所有酪氨酸包括，p< 0.05(紫色)酪氨酸SP 606和归一化的HD不包括在测试在此之前。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs在此之前GITR重申，从分级离子通道，从所有HD(灰色)、所有SP(紫色)和SP 606(深紫色)串连，推断直方上图(e)和核心内容上图(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩检测

上图4 来自亦然快成果的CD4+ treg细胞会操控现象CD4+T细胞会的意志力下降。SP三组用紫色的线或和格子说明，HD三组用黑色的线或和格子说明，深紫色的线或/格子说明酪氨酸sp606。应用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞会展开分选。CD4+CD25−(接收者者)被标识为CFSE, Treg按辨别的人口比例校准。用抗CD3 /28微珠再造细胞会，培植3当晚展开流式细胞会心法验证。(a-d)与CD4+接收者者相对于应的treg培植(自微)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD接收者者培植。(a,b,f) CFSE转化(a,e)和CFSE抑制作用倍数(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的抑制作用倍数。应用于特征性对照(激来生的叛离细胞会不含treg)计算抑制作用倍数。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差数据分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

上图5 现象CD4+T细胞会对亦然快成果的T细胞会再造的抑制作用更敏感。SP三组用紫色的线或和格子说明，HD三组用黑色的线或和格子说明，深紫色的线或/格子说明酪氨酸sp606。应用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞会展开分选。CD4+CD25−(接收者者)被cfsel标识，treg按辨别的人口比例校准。用抗CD3 /28微珠再造细胞会，培植3当晚展开流式细胞会心法(CD25反染)和细胞会因子数据分析。HD Treg与HD、SP或sp606接收者者一同培植。(a,b) CFSE转化(a)和CFSE抑制作用百分亲率(b)。(c,d) CD25抑制作用百分亲率(c)和CD134抑制作用百分亲率(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在粗略估计在此之前的重申。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差数据分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

结论：我们算出的结论是，来自亦然快成果子的再造梦境CD4+Treg在GITR重申在此之前取得了扩展和丰沛，重申了必要性科学研究Treg在1型号心血管疾病风险有机微在此之前的异质性的必要性。

原意出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28