Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐延展

从第一次显现出来呼吸道自身免疫到显现出来1改型癌症诊疗病因的的发展率在成年人一时期就有很好的阐述，多个呼吸道自身免疫非典改型的成年人中所有70%在血清转换后10周内复发癌症，而随访15年的成年人这一%减少到84%。比起之下，占到诊疗1改型癌症一半以上的改型1改型癌症的发病机制还未得到充分的科学研究。

越来越多的人开始应该用于分期系统来下定义1改型癌症的的发展：个体在显现出来多种呼吸道自身免疫时进入第1阶段，显现出来血糖间歇性时进入第2阶段，显现出来病因时进入第3阶段。一些多发呼吸道自身免疫非典改型的个体，在1期和2期，的发展较极快，并发展为发病的1改型癌症。我们在此之后阐述了一第三组在首次扫描到多种呼吸道自身免疫试样后有数10年无癌症的总括极快的发展者，这第三组病征人数少，但特征非常明确。随后，我们辨认出呼吸道自身抗原特异性CD8+T中央线粒体反应该在的发展非常极快的病征中所基本不存在，但在近来发病和长期存在的癌症病征中所很容易扫描到。这意味著指出，与的发展病征比起，这些病征自身免疫反应该的平衡增强。

更早科学研究指出，尽管平衡性T中央线粒体(Treg)数量正常，但癌症病征存在一些功能缺陷，其中所以外对IL-2的反应该潜能降低。此外，癌症病征中所的effectCD4+T中央线粒体意味著对平衡越来越具抵抗性，表现为effectT中央线粒体的抑制作用移向，自然地产生的Treg和人体内产生的抑制作用Treg，以及抗原经历的CD4+T中央线粒体中所IL-2反应该移向。本科学研究的目的是阐述了CD4+平衡性T中央线粒体(Treg)在大群总括非常极快的发展者中所的特征，他们的平均成年人为43岁(31-72岁)，随访时长为18-32年。

方法：BOX科学研究是一项以人群为基础的垂直科学研究，在21岁不限确诊的病征弟女中所安全检查1改型癌症的危险因素。我们在此之后阐述了长期非常极快的发展者的特征，他们持续保持多重呼吸道自身免疫非典改型超过10年，但未显现出来癌症的诊疗病因，极快性或非完成性自身免疫。随后，10名一直持续保持无癌症并想备有大量体液试样的非常极快的发展者划定T和B中央线粒体功能比对。在迄今的科学研究中所，8名极快的发展者(SP第三组)，中所位成年人43岁(31-72岁)，18 - 32岁彼此之间的呼吸道自身免疫非典改型。所有的参加者都始终持续保持1改型癌症的发展的1期，尽管一些人随后失去了呼吸道自身免疫对某些抗原的非典改型反应该，然而，一名病征已经始终持续保持2期有数6年，但未显现出来诊疗病因，一名病征被确诊为癌症，该受试者72岁，在挖掘出检验试样时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在数据比对中所对该酪氨酸完成了单独检验。裂解外周血单个核中央线粒体(PBMCs)，有别于多参数流式中央线粒体忍术和T中央线粒体抑制作用检验检验酪氨酸中所Treg的阈值、表改型和功能。应该用于FlowSOM和CITRUS(聚类检验、表征和回归)完成无统筹聚类比对，检验Treg表改型。

结果：与健康酪氨酸比起，来自极快的发展体的无意识CD4+T中央线粒体的统筹聚类说明了，激活的无意识CD4+ Treg阈值减少，与糖皮质激素抑制作用的TNFR相关蛋白(GITR)传达减少有关。一名HbA1c升高的病征与的发展非常极快者和意味着的印证第三组比起，Treg谱有所并不相同。功能比对指出，与健康酪氨酸比起，来自非常极快的发展体的Treg介导的CD4+effectT中央线粒体抑制作用引人注意受损。表现为对effectCD4+T中央线粒体CD25和CD134传达的抑制作用减少。

布1 深入的表改型比对说明了，CD4+Treg亚改型在极快的发展缓冲区中所减少。由FlowSOM降解的Treg楼内，聚集在来自所有酪氨酸的活CD4+CD45RA -中央线粒体上。根据标示出物传达检验出10个元簇:无意识T中央线粒体_1;无意识T cell_2;无意识T cell_3;无意识T cell_4;CD49b无意识T中央线粒体;HLA-DR + GITR +无意识T中央线粒体;寄存器Treg_1;寄存器Treg_2;寄存器Treg_3;和寄存器Treg_4。(a)应该用于9个并不相同Treg标示出降解的10个元簇的MST。每个路由器代表一个协同(100个协同)，越来越大的元协同(10个元协同)在路由器第三组周围制做。每个路由器中所的糕点布回应该单个标示出的传达级别。(b)每个元聚类的热布，以说明了整体标示出传达。(c, d)为HD第三组(c)和SP第三组(d)降解布，以及FlowSOM辨认的每个元簇的覆盖层。(e-l)相对来说稀土元素为每个metacluster盒中央线布(稀土元素> 0.05%)确定为HD和SP第三组:寄存器Treg_2 (e),寄存器Treg_3 (f),寄存器Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +无意识T中央线粒体(h)、无意识T cell_1(i),无意识T cell_2 (j),无意识T cell_3 (k) n d CD49b无意识T中央线粒体(l)。紫色橘色代表ACSSP 606。**p< 0.01, Wilcoxon意味着大写秩检验。此键适用于布形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

布2 应该用于CITRUS的预测模改型证实，Treg阈值的减少是的发展非常极快的标志。分级门控(a - f)和葡萄比对(g-k)非常SP参加者和意味着的HD参加者在CD4+CD45RA−T中央线粒体上的差异。(a)表改型CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群体的代表性布。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3氟化物，然后通过HLA-DR和GITR传达完成裂解，仿真FlowSOM群体。(b) HD(网纹)和SP(蓝点)第三组以及酪氨酸SP 606(紫色)中所CD25+ cd127的阈值概要布。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控开集的盒中央线布;(c) HLA-DRloGITR−(寄存器Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(寄存器Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(寄存器Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+寄存器T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3传达其中心图例，箭头醒目的簇被辨认为SP和HD缓冲区彼此之间的并不相同。(j)盒中央线布说明了了在SP(蓝点)和HD(灰点)第三组中所，CITRUS无意识Treg_3和Treg_4的相对来说稀土元素(%)。(k)直方布说明了每个簇的表改型(粉红色)和Treg标示出相对来说传达与氛围传达(黄色);上列，寄存器Treg_3;一个大正要，寄存器Treg_4。氛围与所有其他簇中所标示出的传达有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon意味着大写秩检验

布3 与健康献血者比起，的发展非常极快者无意识treg的GITR减少。每个无意识CD4+T中央线粒体元簇(无意识T中央线粒体_1;无意识T cell_2;无意识T cell_3;CD49b +无意识T中央线粒体;HLA-DR + GITR +无意识T中央线粒体;寄存器Treg_2;寄存器Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)扫描每个传达标示出的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)缓冲区的传达热布(sp606不以外在内)。(c,d)无意识Treg_4元簇中所所有HD(黄褐色)、所有SP(黄色)和SP 606(紫色)的FlowSOM GITR传达串联，说明了直方布(c)和概要布(d)。Wilcoxon意味着大写秩和检验，p< 0.07(紫色)所有酪氨酸以外，p< 0.05(黄色)酪氨酸SP 606和意味着的HD不以外在测试中所。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中所GITR传达，从分级门控，从所有HD(黄褐色)、所有SP(黄色)和SP 606(紫色)串联，说明了直方布(e)和概要布(f) *p< 0.05, Wilcoxon意味着大写秩检验

布4 来自非常极快的发展的CD4+ treg中央线粒体操纵effectCD4+T中央线粒体的潜能降低。SP第三组用黄色的中央线和橘色回应该，HD第三组用黄色的中央线和橘色回应该，紫色的中央线/橘色回应该酪氨酸sp606。应该用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T中央线粒体完成分选。CD4+CD25−(此番者)被标示出为CFSE, Treg按通过观察的%起始。用抗CD3 /28微珠增殖中央线粒体，培育3天内完成流式中央线粒体忍术扫描。(a-d)与CD4+此番者相对来说应该的treg培育(自体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD此番者培育。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE抑制作用百分比(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的抑制作用百分比。应该用于非典改型印证(激活的叛离中央线粒体不含treg)计算抑制作用百分比。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差比对。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重非常测试

布5 effectCD4+T中央线粒体对非常极快的发展的T中央线粒体增殖的抑制作用越来越敏感。SP第三组用黄色的中央线和橘色回应该，HD第三组用黄色的中央线和橘色回应该，紫色的中央线/橘色回应该酪氨酸sp606。应该用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T中央线粒体完成分选。CD4+CD25−(此番者)被cfsel标示出，treg按通过观察的%起始。用抗CD3 /28微珠增殖中央线粒体，培育3天内完成流式中央线粒体忍术(CD25反染)和中央线粒体因弟比对。HD Treg与HD、SP或sp606此番者都由培育。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE抑制作用三份(b)。(c,d) CD25抑制作用三份(c)和CD134抑制作用三份(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培育中所的传达。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差比对。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重非常测试

得出结论：我们给出的得出结论是，来自非常极快的发展弟的增殖无意识CD4+Treg在GITR传达中所得到了扩展和非常丰富，突显了进一步科学研究Treg在1改型癌症风险个体中所的异质性的必要性。

原文出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28