Diabetologia：激活但功能受损的无意识Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次注意到肾脏自身血清到注意到1型号心血管疾病临床症状的令人满意率在儿童时期就有很好的详细描述，多个肾脏自身血清非典型号的儿童中的有70%在血清转换后10年内患上心血管疾病，而随访15年的儿童这一比例增大到84%。远比之下，占临床1型号心血管疾病一半以上的型号1型号心血管疾病的患病程序还并未获得合理的系统性。

越来越多的人开始用于分期系统来定义1型号心血管疾病的令人满意：个体在注意到多种肾脏自身血清时进入第1阶段，注意到血糖诱发时进入第2阶段，注意到症状时进入第3阶段。一些多发肾脏自身血清非典型号的个体，在1期和2期，令人满意速度快，并发展为患病的1型号心血管疾病。我们之前详细描述了一第三组在首次验证到多种肾脏自身血清样品后至少10年无心血管疾病的更更慢令人满意者，这第三组病变人口数少，但特征极其具体。随后，我们发现肾脏自身抗原依赖性CD8+T蛋白质质侄化在令人满意比速度快的病变中的基本不存有，但在近来患病和长期存有的心血管疾病病变中的很容易验证到。这可能表明，与令人满意病变远比，这些病变自身免疫质侄化的调节增强。

早期系统性表明，尽管调节性T蛋白质(Treg)为数但会，但心血管疾病病变存有一些动态缺陷，其中的以外对IL-2的质侄化意志力降低。此外，心血管疾病病变中的的畸变CD4+T蛋白质可能对调节更具抵抗性，乏善可陈为畸变T蛋白质的消除消退，自然显现出的Treg和肾脏显现出的诱导Treg，以及抗原经历的CD4+T蛋白质中的IL-2质侄化消退。本系统性的目的是详细描述了CD4+调节性T蛋白质(Treg)在一小群极比速度快令人满意者中的的特征，他们的岁数为43岁(31-72岁)，随访短时间为18-32年。

方法：BOX系统性是一项以人群为基础的纵向系统性，在21岁一般而言就诊的病变亲属中的检查1型号心血管疾病的生命危险因素。我们之前详细描述了长期比速度快令人满意者的特征，他们保持良好多重肾脏自身血清非典型号超过10年，但并未注意到心血管疾病的临床症状，更慢性或非进行时性自身免疫。随后，10名继续保持良好无心血管疾病并愿意提供大量尿液样品的比速度快令人满意者纳入T和B蛋白质动态系统性。在目前的系统性中的，8名更慢令人满意者(SP第三组)，中的位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的肾脏自身血清非典型号。所有的自发性都处于1型号心血管疾病令人满意的1期，尽管一些人随后失去了肾脏自身血清对某些抗原的非典型号质侄化，然而，一名病变已经处于2期至少6年，但并未注意到临床症状，一名病变被诊断为心血管疾病，该成年人72岁，在搜集实验样品时，其HbA1c增大到53 mmol/mol(7%)，在生物信息学中的对该NAD进行时了单独检验。分离外周血单个核子蛋白质(PBMCs)，运用于多表述式流式蛋白质术和T蛋白质消除试验检验NAD中的Treg的频率、性状号和动态。用于FlowSOM和CITRUS(聚类确认、表征和回归)进行时无委派聚类系统性，检验Treg性状号。

结果：与肥胖症NAD远比，来自更慢令人满意体的遗忘CD4+T蛋白质的委派聚类推断，介导的遗忘CD4+ Treg频率增大，与糖皮质激素诱导的TNFR相关蛋白(GITR)表述增大有关。一名HbA1c增大的病变与令人满意比速度快者和匹配的对应第三组远比，Treg谱有所并不相同。动态系统性表明，与肥胖症NAD远比，来自比速度快令人满意体的Treg介导的CD4+畸变T蛋白质消除明显破损。乏善可陈为对畸变CD4+T蛋白质CD25和CD134表述的消除增大。

三幅1 深入的性状号系统性推断，CD4+Treg亚型号在更慢令人满意函数调用中的增大。由FlowSOM转化成的Treg一楼，聚集在来自所有NAD的活CD4+CD45RA -蛋白质上。根据标示出物表述确认出10个元簇:遗忘T蛋白质_1;遗忘T cell_2;遗忘T cell_3;遗忘T cell_4;CD49b遗忘T蛋白质;HLA-DR + GITR +遗忘T蛋白质;CPUTreg_1;CPUTreg_2;CPUTreg_3;和CPUTreg_4。(a)用于9个并不相同Treg标示出转化成的10个元簇的MST。每个节点代表一个集群(100个集群)，更大的元集群(10个元集群)在节点第三组周围上色。每个节点中的的饼三幅坚称单个标示出的表述级别。(b)每个元聚类的热三幅，以推断整体标示出表述。(c, d)为HD第三组(c)和SP第三组(d)转化成三幅，以及FlowSOM定位的每个元簇的裂口。(e-l)比较总质量为每个metacluster罐两条路线三幅(总质量> 0.05%)确定为HD和SP第三组:CPUTreg_2 (e),CPUTreg_3 (f),CPUTreg_4 (g), HLA-DR + GITR +遗忘T蛋白质(h)、遗忘T cell_1(i),遗忘T cell_2 (j),遗忘T cell_3 (k) n d CD49b遗忘T蛋白质(l)。黄色橘色代表**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon相加标记秩检验。此键适用于三幅形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

三幅2 用于CITRUS的预测模型号声称，Treg频率的增大是令人满意比速度快的标志。基准除此以外(a - f)和柑橘系统性(g-k)比较SP自发性和匹配的HD自发性在CD4+CD45RA−T蛋白质上的差异性。(a)表型CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l社会性的民族特色三幅。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3非金属，然后通过HLA-DR和GITR表述进行时分离，模拟FlowSOM社会性。(b) HD(外缘)和SP(蓝点)第三组以及NADSP 606(黄色)中的CD25+ cd127的频率汇总三幅。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+除此以外侄集的罐两条路线三幅;(c) HLA-DRloGITR−(CPUTreg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(CPUTreg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(CPUTreg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+CPUT cell)。(g - i)甜菜簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3表述强度着色，圆圈出彩的簇被定位为SP和HD函数调用之间的并不相同。(j)罐两条路线三幅推断了在SP(蓝点)和HD(灰点)第三组中的，CITRUS遗忘Treg_3和Treg_4的比较总质量(比例)。(k)直方三幅推断每个簇的性状号(粉红色)和Treg标示出比较表述与背景表述(黄色);上列，CPUTreg_3;上头一行，CPUTreg_4。背景与所有其他簇中的标示出的表述有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon相加标记秩检验

三幅3 与肥胖症献血者远比，令人满意比速度快者遗忘treg的GITR增大。每个遗忘CD4+T蛋白质元簇(遗忘T蛋白质_1;遗忘T cell_2;遗忘T cell_3;CD49b +遗忘T蛋白质;HLA-DR + GITR +遗忘T蛋白质;CPUTreg_2;CPUTreg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)验证每个表述标示出的变异。(a,b)来自HD (a)和S (b)函数调用的表述热三幅(sp606不以外在内)。(c,d)遗忘Treg_4元簇中的所有HD(灰色)、所有SP(黄色)和SP 606(黄色)的FlowSOM GITR表述串接，推断直方三幅(c)和汇总三幅(d)。Wilcoxon相加标记秩和检验，p< 0.07(黄色)所有NAD以外，p< 0.05(黄色)NADSP 606和匹配的HD不以外在测试中的。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中的GITR表述，从基准除此以外，从所有HD(灰色)、所有SP(黄色)和SP 606(黄色)串接，推断直方三幅(e)和汇总三幅(f) *p< 0.05, Wilcoxon相加标记秩检验

三幅4 来自比速度快令人满意的CD4+ treg蛋白质操控畸变CD4+T蛋白质的意志力降低。SP第三组用黄色的两条路线和橘色坚称，HD第三组用黑色的两条路线和橘色坚称，黄色的两条路线/橘色坚称NADsp606。用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T蛋白质进行时分选。CD4+CD25−(这样的话者)被标示出为CFSE, Treg按推论的比例氢氧化钠。用抗CD3 /28微珠重置蛋白质，人才培养3天后进行时流式蛋白质术验证。(a-d)与CD4+这样的话者比较应的treg人才培养(自体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD这样的话者人才培养。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE消除百分比(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的消除百分比。用于非典型号对应(介导的响应蛋白质不含treg)量化消除百分比。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差系统性。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

三幅5 畸变CD4+T蛋白质对比速度快令人满意的T蛋白质重置的消除更敏感性。SP第三组用黄色的两条路线和橘色坚称，HD第三组用黑色的两条路线和橘色坚称，黄色的两条路线/橘色坚称NADsp606。用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T蛋白质进行时分选。CD4+CD25−(这样的话者)被cfsel标示出，treg按推论的比例氢氧化钠。用抗CD3 /28微珠重置蛋白质，人才培养3天后进行时流式蛋白质术(CD25反染)和蛋白质因侄系统性。HD Treg与HD、SP或sp606这样的话者合作人才培养。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE消除百分比(b)。(c,d) CD25消除百分比(c)和CD134消除百分比(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共人才培养中的的表述。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差系统性。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

结论：我们算出的结论是，来自比速度快令人满意侄的重置遗忘CD4+Treg在GITR表述中的获得了扩展和独特，强调了进一步系统性Treg在1型号心血管疾病高风险个体中的的系统性的必要性。

原文出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28